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用常規反相色譜柱進行樣品分析的注意要點

更新時間:2017-12-19瀏覽:1886次
反相色譜柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8、C4、C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
反相色譜柱進行樣品分析時:
1確保流動相潔凈,每隔24-48小時就應新配水相流動相,并同時更換或仔細清洗流動相溶劑瓶,以避免流動相長菌。確保實驗室純水系統工作正常。
2確保樣品不含顆粒型雜質。如樣品過臟,或有微粒存在,需要考慮適合的樣品制備方法。在使用樣品過濾器時,確保濾膜為0.22μm,且與樣品溶劑*兼容(不發生溶解)。也可考慮使用高速離心法去除顆粒性雜質,例如8000rpm轉速以上離心20分鐘后,移取樣品上清液進樣。
3確保樣品溶液與流動相條件兼容,進樣后不會發生沉淀、或溶劑不互溶情況。通常使用流動相或比流動相洗脫強度弱的溶液(即有機溶劑比例較低)溶解或稀釋樣品,這樣可以獲得的峰形和檢測靈敏度。
4如系統在線混合生成流動相,預先檢查流動相各組分的兼容性。例如,當磷酸鹽緩沖液與高濃度乙腈(例如≥70%)混用時,可能發生鹽析出。
5了解色譜柱的操作使用限度。如果所使用的流動相條件、柱溫、以及樣品溶液條件,不利于色譜柱壽命時,請使用保護柱以延長柱壽命。
6在使用流動相進行柱平衡之前,如果流動相中含有可能析出的緩沖鹽,先使用5倍柱體積的有機溶劑-水溶液進行過渡。例如,在使用40/60甲醇/磷酸鹽緩沖液流動相之前,先使用5倍柱體積的40/60甲醇/純水溶液沖洗色譜柱。
7在常規分析過程中,每針或間隔若干針清洗柱內可能積累的污染物。完成分析后,*清洗色譜柱,除去柱內緩沖鹽和污染物。
8在反相色譜柱使用過程中,定期進行柱效測試,記錄塔板數與壓力,從而追蹤監控色譜柱的性能變化。柱效測試方法應固定。
9反相色譜柱應保存于合適的高比例或100%有機相(如乙腈或甲醇)中。如色譜柱使用于高溫或PH條件,或停用色譜柱超過72小時,用100%乙腈保存色譜柱。
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