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氨基柱在使用前怎么進行活化處理?

更新時間:2018-08-27瀏覽:9757次
氨基柱是同時可以用于正相和反相條件的一種色譜柱。但正相溶劑和反相溶劑是不互溶的,這一點不能忽略。對于新購柱子,首先請注意打開分析測試說明書,了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動相極性不同不會互溶,請先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大,會導(dǎo)致柱壓很高,適當調(diào)低流速。如果流動相中還有緩沖鹽類,先用不含緩沖鹽的同比例流動相過渡,避免緩沖鹽的析出。
柱效檢測: 流動相:10%乙酸乙酯+90%正己烷 流速1.0
標準溶液:乙苯(或甲苯)+苯甲酸甲酯
檢測波長254nm
這個方法特別適用于新購柱子(新購柱子往往保存在正相溶劑中)時即進行檢測,如有問題,可及時與供應(yīng)商溝通。
(1) 平時在正相條件下使用:
首先用50倍柱體積的異丙醇清洗,因異丙醇粘度較大需適當放低流速;之后,用50倍的甲醇清洗;之后,用異丙醇過渡回到平常使用的正相流動相,即可。
(2)平時在反相條件下使用:
緩沖鹽應(yīng)及時沖洗,不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等,屬常識就不作特別交待。
用50倍純甲醇沖洗;之后,用異丙醇過渡后,用二氯甲烷沖洗色譜柱;之后,再用異丙醇過渡回來到甲醇條件下。
這些清洗方法,主要是針對當樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時的處理方法,色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等。
一般C18或C8反相色譜柱,不能用純水沖洗,有機相比例至少5%,否則鍵合相碳鏈會發(fā)生卷曲,導(dǎo)致色譜柱性能不穩(wěn)定。
如果是正相柱,是肯定不能用水沖的,極少量的水都可能對色譜柱造成不可逆的損害。
其他柱,氨基柱由正相過渡到反相系統(tǒng)時,可以用堿性水溶液(pH不可過高,會水解)和純水沖洗,氨基柱一般不用純水,但可以用乙腈等的水溶液沖柱,但是不能長時間沖。氨基柱跟氰基柱在水相中都有水解問題,用在反相系統(tǒng)時需特別注意pH值。
氨基柱活化是指新裝色譜柱在使用前要進行老化處理,其目的是取出殘留的溶劑、水分和低沸點雜質(zhì),同時也使固定液在載體表面形成均勻的膜。
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