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生物分析色譜柱的選擇

更新時間:2019-02-25瀏覽:2559次
   生物分析色譜柱的選擇
 
  生物分析色譜柱就是填裝有固定相的柱管。宏觀上,色譜柱是由柱管和填料組成,那么生物分析色譜柱的選擇就要從填料和柱管規格來選擇。
 
  1.填料的選擇:即根據化合物的屬性選擇適合其分離的色譜模式及固定相。
 
  2.柱規格選擇:生物分析色譜柱規格的選擇要從內徑和柱長兩個指標來考慮。不同內徑的色譜柱用途:2.1mm和3.0mm內徑色譜柱一般用于超液相色譜分析UPLC(分析時間短,效率高);4.6mm內徑色譜柱一般用于常規液相色譜分析HPLC;10.0-300mm內徑色譜柱一般用于制備色譜PreHPLC。不同柱長色譜柱優勢:UPLC一般柱長為50-100mm;常規HPLC和PreHPLC中,50-100mm柱長適用于易分離樣品,且分析時間短。150-300mm柱長適于難分離或分離度要求高的樣品,分析時間長。柱長越長,其柱效越高,但由于裝柱技術限制,300mm以上長度,柱效會相對更低,因此很少有大于300mm的柱長。
 
  微觀上,色譜柱填料的規格又包括粒徑,孔徑,比表面積,封尾程度。粒徑:色譜柱所裝填料的顆粒直徑。粒徑大小一般有1.7μm,2.7μm,3.5μm,5μm,10μm,15μm,20μm,20-40μm,40-60μm。其中1.7-3.5μm主要用于UPLC快速分析,5μm填料主要用于常規HPLC,10μm-20μm通常用于高壓制備色譜(PreHPLC),20-40μm和40-60μm為粒徑不均勻填料,用于中低壓制備色譜(MPLC)。
 
  粒徑越小,柱壓越高,分離度及靈敏度也越高??讖剑禾盍项w粒的表面和內部的孔的尺寸。100?,150?,200?,300?(更適合分離空間結構較大的大分子化合物,如核苷酸,蛋白等)。比表面積:單位質量填料顆粒表面和內部孔的面積之和。比表面積越大,與樣品的接觸位點越多,載樣量越大,對樣品的保留越強,柱效越高。
 
  封尾:將硅膠顆粒表面的裸露的硅羥基用小分子硅烷鍵合掉。封尾降低了硅膠填料的活性,減少填料對堿性化合物形成氫鍵而造成的拖尾。同時封尾的色譜柱比不封尾的少了氫鍵作用的選擇性,因此對組分復雜樣品更適合選擇不封尾或一次封尾的色譜柱。
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