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脂質納米粒(LNP)SEC分析的色譜柱選擇

更新時間:2022-11-01瀏覽:1080次

2018年,全球款采用脂質納米粒 (LNP) 遞送siRNA的核酸藥物獲批。近,由于新的脂質成分及生產方法的研發,開發了針對SARS-CoV-2冠狀病毒的LNP遞送的mRNA疫苗。該LNP的模式圖、示意圖如下。

 

LNP1.png

圖1  雙層脂質體(左)和單層脂質體(右)

 



文獻介紹



近期,在 J. Chromatogr. B 期刊上發表的一篇研究文獻中,作者等人認為LNP的大小和mRNA含量 (payload) 對于了解藥效和副作用是非常重要的。因此采用了尺寸排阻色譜,并在UV檢測器、RI檢測器以及MALS檢測器上直接連接了動態光散射 (DLS) 檢測器,在線進行LNP的粒徑分析。

LNP2.png

文獻鏈接:https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2021.123015

遞送mRNA的LNP是表面帶正電荷的陽離子LNP,采用了適合分離陽離子大分子的SEC色譜柱TSKgel G6000PWXL-CP,有效分離出半徑30~70 nm的各種LNP另外,還可以看出,SEC的在線分析結果與離線分析結果非常吻合,并且mRNA含量受到LNP的PEG修飾脂質含量的影響。

LNP3.png

圖2. 采用G6000PWXL-CP色譜柱分離4個mRNA-LNP

 

 




LNP分析用SEC色譜柱的選擇



 



陽離子LNP的分離

陽離子LNP的SEC分離與陽離子聚合物的分離基本相同。對于直徑在60~140 nm的LNP,推薦使用TSKgel G6000PWXL-CP;直徑在20~100 nm的LNP,推薦使用TSKgel G5000PWXL-CP。

非陽離子(中性或陰離子)LNP、脂質體

LNP與脂質體基本相同,但脂質體是中性脂質成分的粒子,可以用普通PWXL系列色譜柱分析。對于直徑在60~140 nm的非陽離子LNP,推薦使用TSKgel G6000PWXL或TSKgel G-DNA-PW;直徑在20~100 nm的LNP,推薦使用TSKgel G5000PWXL

 




LNP分析用色譜柱產品信息



 



LNP4.png

 

 








參考文獻:

1. S. Daniel et al., Quality by design for enabling RNA platform production processes, Trends in Biotechnology, 2022, ISSN 0167-7799, CC BY

https://doi.org/10.1016/j.tibtech.2022.03.012

2. C. Widmann [white paper] Regulatory consideration for excipients used in lipid nanoparticles, Bioprocess International, by BPI contributor, Thursday June 9, 2022,

3. X. Jia et al., Enabling online determination of the size-dependent RNA content of lipid nanoparticle-based RNA formulations, J. Chromatography B, 1186 (2021) 123015, CC BY NC ND, https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2021.123015  

4. J. Zhang et al., Polydispersity characterization of lipid nanoparticles for siRNA delivery using multiple detection size-exclusion chromatography,

Anal. Chem., 84 (2012) 6088-6096, https://doi.org/10.1021/ac3007768

 

 

 

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