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【技術分享】SEC分析中樣品吸附的改善——流動相及色譜柱應對策略

更新時間:2023-12-05瀏覽:686次

使用尺寸排阻色譜法(SEC)分離生物大分子時,有時會發生因樣品吸附在色譜柱上,而導致色譜圖變化或出現異常洗脫峰的現象。該現象往往是樣品的疏水性和靜電作用引起,有時在分離時反映為色譜柱間差異。為解決這類問題,可以通過向流動相中添加各種試劑來抑制吸附,以實現正常的SEC分離。

我們匯總了可以抑制樣品與色譜柱之間相互作用的試劑種類,并歸納了不同SEC流動相改善色譜分離效果的示例。希望能給大家的分析工作提供參考。

一、可添加試劑的種類及效果

二、不同SEC流動相的改善示例

下表是按照樣品分類歸納了SEC流動相對樣品吸附、相互作用的改善示例。雖然在出現靜電相互作用時,向流動相中添加鹽便可抑制,在發生疏水相互作用時,選擇哪種添加試劑是非常重要的。

另外,由于添加試劑可能會導致生物大分子的結構發生顯著變化、失活或變性,因此需要特別注意。

三、色譜柱的老化處理

在SEC色譜柱的使用初期,常會出現蛋白質多聚體等物質吸附于色譜柱的現象。防止該現象的對策是可以對色譜柱進行老化處理(預處理)。


01
色譜柱老化處理示例1:

將目標樣品(相對含有較多多聚體的情況)重復進樣5~10次,然后進行清洗。
02
色譜柱老化處理示例2:

將市售的人血清(10 g/L、過濾樣品)重復進樣5~10次,然后進行清洗。


請在色譜柱的老化處理后分析目標樣品,確認多聚體等物質的洗脫峰面積已經穩定。不過,色譜柱的老化處理是最后的辦法,建議大家盡量去找到合適的流動相以抑制吸附。如果您有色譜柱使用或維護保養方面的任何問題,歡迎聯系東曹技術中心。



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