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使用尺寸排阻色譜法(SEC)分離生物大分子時,有時會發生因樣品吸附在色譜柱上,而導致色譜圖變化或出現異常洗脫峰的現象。該現象往往是樣品的疏水性和靜電作用引起的,有時在分離時反映為色譜柱間差異。為解決這類問題,可以通過向流動相中添加各種試劑來抑制吸附,以實現正常的SEC分離。
我們匯總了可以抑制樣品與色譜柱之間相互作用的試劑種類,并歸納了不同SEC流動相改善色譜分離效果的示例。希望能給大家的分析工作提供參考。
一、可添加試劑的種類及效果
二、不同SEC流動相的改善示例
下表是按照樣品分類歸納了SEC流動相對樣品吸附、相互作用的改善示例。雖然在出現靜電相互作用時,向流動相中添加鹽便可抑制,在發生疏水相互作用時,選擇哪種添加試劑是非常重要的。
另外,由于添加試劑可能會導致生物大分子的結構發生顯著變化、失活或變性,因此需要特別注意。
三、色譜柱的老化處理
在SEC色譜柱的使用初期,常會出現蛋白質多聚體等物質吸附于色譜柱的現象。防止該現象的對策是可以對色譜柱進行老化處理(預處理)。
請在色譜柱的老化處理后分析目標樣品,確認多聚體等物質的洗脫峰面積已經穩定。不過,色譜柱的老化處理是最后的辦法,建議大家盡量去找到合適的流動相以抑制吸附。如果您有色譜柱使用或維護保養方面的任何問題,歡迎聯系東曹技術中心。