離子交換色譜的基本原理：

離子交換色譜是蛋白純化技術中常用的一種純化方法，其原理是指被分離物質所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結合，這種帶電分子與固定相之間的結合作用是可逆的，在改變pH或者用逐漸增加離子強度的緩沖液洗脫時，離子交換劑上結合的物質可與洗脫液中的離子發生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質的電荷不同，其與離子交換劑的結合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同，從而被分離出來。

離子交換色譜柱常見問題分析：

1.純化后樣品純度不高怎么辦？
?若目標蛋白和雜蛋白等電點差異較大，目標蛋白通過穿透步驟獲得，通過調節起始緩沖液pH，使目標蛋白與填料之間的靜電作用更強；
?若目標蛋白和雜蛋白等電點差異較小，目標蛋白通過洗脫步驟獲得，過調節起始緩沖液pH，使目標蛋白與填料之間的靜電作用更強；再調節洗脫溶液的離子強度和pH，使目標蛋白與雜蛋白逐漸分離；
?選擇合適的離子交換填料及粒徑；
?柱沒有經過起始緩沖液的充分平衡；
?降低洗脫流速；
?調整樣品溶液黏度。
2.純化后的蛋白收率較低怎么辦？
?調整樣品pH，使樣品pH與起始緩沖液pH保持一致；
?改變洗脫模式，如將線性梯度模式改變為階段性梯度洗脫；
?改變洗脫方法，如將pH洗脫方法改為鹽梯度洗脫方法；
?改變洗脫強度。
3.樣品過于粘稠怎么處理？
?樣品過于粘稠可能是由于含有的蛋白太多，或者含有大分子量的核酸分子，通常有以下解決方法：
?增加裂解前稀釋細胞所用體積；
?增加裂解時間，直至黏度下降，或者增加DNase和Mg2+的劑量；
?增加機械裂解細胞的效率；
?降低上樣流速。